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曲霉菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系的建立 研究背景 曲霉菌屬(aspergillus )： 屬絲狀真菌，是一種常見(jiàn)的條件致病性真菌，好發(fā)于免疫低下及缺陷的人群 在免疫缺陷、惡性腫瘤、器官移植 患者中的感染率呈上升趨勢(shì) 研究背景 研究背景 研究背景 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)菌株 真菌標(biāo)準(zhǔn)株：煙曲霉(CGMCC3.5305)、黃曲霉(CGMCC3.5306)、土曲霉(CGMCC3.4341)、黑曲霉(CGMCC3.4335)購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)通微生物菌種保藏管理中心 主要試劑 一步法結(jié)合加熱法DNA提取試劑盒：湖南圣湘生物有限公司 E.Z.N.A. TM Fungal DNA Mini Kit(真菌DNA提取試劑盒)：OMEGA公司 實(shí)驗(yàn)方法 1.SDA培養(yǎng)基培養(yǎng)曲霉菌 2.制備DNA提取標(biāo)本及提取DNA 3.分光光度計(jì)檢測(cè)兩種方法的DNA濃度及OD值 4.熒光定量PCR比較兩種方法，觀察曲線 5.利用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析不同方法提取DNA擴(kuò)增的效果 全文結(jié)論 1. 對(duì)于曲霉菌屬固體組織標(biāo)本，液氮研磨法提取DNA濃度、純度高，對(duì)于曲霉菌屬標(biāo)準(zhǔn)株培養(yǎng)的孢子沖洗標(biāo)本，一步結(jié)合加熱法提取曲霉菌DNA操作簡(jiǎn)單、能有效的運(yùn)用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。 全文結(jié)論 2. 成功篩選出煙曲霉菌、黃曲霉菌、土曲霉菌、黑曲霉菌引物探針，并建立了曲霉菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系，其檢測(cè)體系特異性、靈敏性高及重復(fù)性好。 展望 本實(shí)驗(yàn)已成功建立了特異性、靈敏性高、重復(fù)性好的曲霉菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系 后續(xù)實(shí)驗(yàn)將繼續(xù)收集更多臨床標(biāo)本，對(duì)DNA提取方法及引物探針進(jìn)行驗(yàn)證 可能存在的問(wèn)題： 1.血漿、肺泡灌洗液等臨床標(biāo)本，可能存在影響DNA提取效果的成分 2.最好探索出通用型的曲霉菌屬探針，用于臨床感染的篩查UAK紅軟基地

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